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使用液相色譜柱時應(yīng)當注意哪些事項

點擊次數(shù):1363 發(fā)布時間:2020-08-21
  使用液相色譜柱時應(yīng)當注意哪些事項
  液相色譜柱的技術(shù)主要包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)沒有想象中那么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,需要經(jīng)驗積累。
  一般情況下,正相反相柱應(yīng)該都能反沖,只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖,不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,反沖后還是正著用比較好,以免柱子的兩頭都被污染。建議正向使用,反向沖洗。
  使用該色譜柱時應(yīng)當注意以下事項:
  避免過柱壓:雖然液相色譜柱能耐受的壓力可達6000psi,但過及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是:柱壓過時,盡可能采用較小的流速,以不過柱允許壓力的一半為宜。當流速較大時,應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。使用手動進樣閥時,進樣閥的切換要盡可能的快。否則過20%的壓力沖擊會快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時,柱切換要避免在壓下進行。
  當流動相中含有緩沖鹽時,則過濾是必要的,當緩沖溶液放置一段時間(視環(huán)境溫度不同而異,夏季一般不過48h,冬季一般不過一周)后,在使用前還應(yīng)重過濾。
  過濾流動相和樣品:流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾,但在實際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它純水時,在能確保水和有機溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。
  需要加裝保護柱:保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學雜質(zhì)的同時,也可以除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污染,因此加裝保護柱是必要的,是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱*的措施。

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